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1 主题内容与适用范围
本标准规定了肉与肉制品中聚磷酸盐的测定方法。
本标准适用于肉和肉制品中添加的聚磷酸盐的测定。
2 引用标准
GB 9695.19肉与肉制品 取样方法
3 原理
用三氯乙酸提取肉和肉制品的聚磷酸盐、提取液经乙醇、乙醚处理后,用微晶纤维素薄层层析板分离,通过喷雾显色检验聚磷酸盐。
4 试剂
所用试剂均为分析纯,所用水为蒸馏水或相当纯度的水。
4.1 三氯乙酸(HG 3—1105)。
4.2 乙醚(HG 3—1002)。
4.3 95％乙醇(GB 679)。
4.4 薄层板：用薄层用的微晶纤维素制备,或同样的予制板。
4.5 可溶性淀粉(HG B 3095)。
4.6 标准参比混合液
在100mL水中溶解下列物质：
磷酸二氢钠NaH2PO4·H2O (GB 1267): 200mg
焦磷酸四钠Na4P2O7·10H2O (HG 3—1288)：300mg
三磷酸五钠Na5P3O10 (HC 3—1288)：200mg
六偏磷酸钠(NaPO3) x [ x ＞ 10] (HC 3—1288): 200mg
4.7 展开剂
将异丙醇(HG 3—1167) 140mL,浓度为135g/L的三氯乙酸(HG 3—1105)水溶液40mL,氢氧化铵(GB 631) 0.6mL混合均匀,放入密闭瓶中。
4.8 显色剂Ⅰ
将同体积的浓硝酸(GB 1282)与浓度为75g/L的四水钼酸铵(GB 657)溶液混合,在100mL上述溶液中溶解酒石酸(GB 1294) 10g。(现用现配)
4.9 显色剂Ⅱ
在浓度为150g/ L焦亚硫酸钠(HG 3—909)溶液195mL与浓度为200g/L的亚硫酸钠(HG 3—1078)溶液5mL的混合液中溶解1-氨基-2-萘-4-磺酸(HG 3—1528) 0.5g,再在此溶液中溶解结晶乙酸钠(GB 693) 40g。溶液贮于密闭的棕色瓶中,于冰箱保存,可存放一周。
5 仪器和材料
5.1 实验室常规仪器。
5.2 绞肉机,孔径不超过4mm。
5.3 实验室用匀浆器。
5.4 涂0.25mm厚板的涂布器。
5.5 玻璃板：10×20cm**2, 5×20cm**2。
5.6 层析缸。
5.7 微量注射器。
5.8 吹风机：有冷、热风挡。
5.9 喷雾器。
6 试样
6.1 按GB 9695.19取样。
6.2 至少取有代表性的试样200g,于绞肉机中至少绞两次使其均质化并混匀,贮于密闭容器中备用。
6.3 尽快分析试样,不得超过5h。
7 分祈步骤
7.1 薄层板的制备
将可溶性淀粉0.3g溶解在90mL沸水中,冷却后加入微晶纤维素粉15g,用匀浆器均化1min。用涂布器把浆液涂在玻璃板上,铺成0.25mm厚的浆层,在室温下自然干燥1h,再在100℃烘箱中加热10min,取出立即放入干燥器中。
也可以用予制的微晶纤维素板。
7.2 提取聚磷酸盐
将40～60℃的水15mL倒入装有50g试样的烧杯中,搅拌,不超过5min。加入三氯乙酸10g,彻底搅匀。迅速放入冰箱冷却1h后,取出,用扇形滤纸过滤。
若滤液混浊,加固体积的乙醚摇动一次,用吸管吸出醚弃去,水相中加入同体积的乙醇振摇1min,静置几分钟,用扇形滤纸过滤。
7.3 薄层层析分离
将适量展开剂倒入层析缸中,使深度为5～10mm,盖上盖,避光静置30min。
用微量注射器取提取液3μL, 若是经过澄清处理的取6μL, 点在距板底边约2cm处的师薄层板上, 尽量使点的直径很小。用吹风机的冷风档吹干。
注：避免热风,防止磷酸盐水解。
用同法将标准参比液3μL点在同一块板上,距样品点1～1.5cm,距板底距离与样品点一致。
打开层析缸盖,迅速而小心地把点过样的薄层板放入缸中,盖上盖,避光在室温下展开。
展开到溶剂前沿上升约10cm处,取出薄层板,放进烘箱中干燥10min。(可在室温下干燥30min或用吹风机冷风档吹干)。
7.4 碳酸盐的检验
展开过的薄层板立在通风橱中,用喷雾器把显色剂Ⅰ均匀地喷到板上,出现黄斑。用吹风机吹干簿层板,放进100℃烘箱至少烘1h,把硝酸全部除去。薄层板冷却至室温,再放入通风橱中,喷显色剂Ⅱ,出现明显的蓝斑。
注：不是绝对要喷显色剂Ⅱ,但此显色剂产生强烈的蓝斑可提高检测效果。
同一试样进行两次检验。
8 分析结果的表示
将试样的斑点与磷酸盐标准参比混合液斑点移动距离相比较。
标准参比混合液磷酸盐的Rf值见下表：
名 称 Rf
正磷酸盐 0.70～0.80
焦磷酸盐 0.35～0.50
三聚磷酸盐 0.20～0.30
六偏磷酸盐 0
一般在肉和肉制品中提取磷酸盐的Rf值偏低。
注：可用鲜肉的提取液校正磷酸盐的Rf值,鲜肉中只含正磷酸盐。 |
